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通俗易懂:幾張圖看懂分子間互作的5大實驗方法!

時間:2020-01-11| 作者:Admin

分子間互作的5大實驗方法:①蛋白質-蛋白質   ②蛋白質-RNA   ③蛋白質-DNA   ④蛋白質-DNA/RNA     ⑤RNA-DNA

 

 

一、蛋白質-蛋白質

1.免疫沉淀(IP

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2.免疫共沉淀(co-IP)

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3.GST pull-down

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4.co-IP GST pull-down區(qū)別

co-IP:研究的是體內自然狀態(tài)下的蛋白質互相作用,反應的是比較真實的蛋白質相互作用,由于沉淀下來的是蛋白質復合物,不能顯示蛋白質之間的相互作用是直接還是間接的。

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GST pull down:可以確定目的蛋白和檢測蛋白是否發(fā)生直接相互作用,但是無法得知體內真實的結合情況;

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二、蛋白質-RNA

1.蛋白質與RNA相互作用

RNA結合蛋白

RNA結合蛋白

微小RNA結合蛋白(如,Ago2

RNA

mRNAlncRNAcircRNAmicRNA

1-8.png 

 

RIP:以蛋白為主角,研究RNA與蛋白的互作

1-9.png 

 

RNA pulldown:以RNA為主角,研究其與蛋白的互作

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2RNA結合蛋白免疫沉淀技術(RIP)

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3.RNA pull down

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三、蛋白質-DNA

染色質免疫共沉淀技術(ChIP)

體內研究DNA與蛋白質作用反應細胞內轉錄因子與啟動子Promoter的結合情況。

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四、蛋白質-DNA/RNA

凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)

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五、熒光素酶實驗

1.啟動子活性研究

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2.基因3’UTR區(qū)和microRNA結合實驗

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